产品货号:
WH0120
中文名称:
植物基因组DNA提取试剂盒(磁珠法)
英文名称:
Magnetic Plant Genomic DNA Extraction Kit
产品规格:
50次|200次
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和独特的缓冲液系统,可以从多种植物组织中分离纯化高质量基因组DNA。独特包埋的磁珠,在一定条件下对核酸具有很强的亲和力,而当条件改变时,磁珠释放吸附的核酸,能够达到快速分离纯化核酸的目的。整个过程安全、便捷,提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠,尤其适合高通量工作站的自动化提取。使用本试剂盒纯化的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交、芯片检测、高通量测序等实验。
以100mg不同植物幼嫩叶片为例,OD260/OD280:1.7~1.9
室温(15~25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2~8℃。2~8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中孵育10min,以溶解沉淀。
请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
使用前请先在去蛋白液RD和漂洗液PWB中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶子上的标签。
一、手工操作步骤
二、移液法自动化仪器提取步骤
三、磁棒法自动化仪器提取步骤
DNA浓度及纯度检测:
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- 简便快捷:1h内即可获得超纯的基因组DNA;
- 高通量:可整合移液法和磁棒法自动化仪器进行高通量提取实验;
- 广泛:适用于多种植物组织;
- 安全无毒:无需酚/氯仿等有毒有机试剂;
- 纯度高:获得的DNA纯度高,可直接用于芯片检测、高通量测序等实验。
以100mg不同植物幼嫩叶片为例,OD260/OD280:1.7~1.9
植物材料 | 平均DNA产量 |
小麦 | 18~25μg |
松树 | 25~30μg |
马铃薯 | 4~6μg |
番茄 | 10~15μg |
烟草 | 10~15μg |
水稻 | 10~25μg |
大豆 | 10~25μg |
玉米 | 20~30μg |
棉花 | 10~25μg |
组分 | 50次 | 200次 |
缓冲液GPM | 25mL | 100mL |
缓冲液GPM plus | 25mL | 100mL |
缓冲液GHB | 20mL | 80mL |
去蛋白液RD | 12mL | 48mL |
漂洗液PWB | 15mL | 50mL |
RNase A(10mg/ml) | 300μL | 1.25mL |
磁珠悬浮液G | 1mL | 3×1mL |
洗脱缓冲液TB | 15mL | 60mL |
室温(15~25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2~8℃。2~8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中孵育10min,以溶解沉淀。
请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
- 本产品适用于手工提取或自动化仪器整合。
- 自备试剂:异丙醇,无水乙醇。
- 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
- 若裂解液GHB中有沉淀,可在37℃水浴中重新溶解,摇匀后使用。
使用前请先在去蛋白液RD和漂洗液PWB中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶子上的标签。
一、手工操作步骤
- 取植物新鲜组织约100mg或干重组织约30mg,加入液氮充分碾磨。
img src="/pic5/WH0120.jpg" alt="植物液氮研磨图例" title="植物液氮研磨图例"> - 将研磨好的粉末迅速转移到预先装有400μL缓冲液GPM和5μL RNase A(10mg/ml)的离心管中,迅速颠倒混匀后,将离心管放在70℃水浴10min,水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。
注:若提取富含多糖多酚的植物组织,可使用缓冲液GPM plus。 - 12000rpm (~13400×g)离心4min,转移300μL上清至新的离心管中。
- 加入300μL缓冲液GHB,300μL异丙醇和15μL磁珠悬浮液G,振荡混匀。
- 室温放置5min。
- 将离心管放置于磁力架上静置1min,待磁珠完全吸附时小心去除液体。
- 将离心管从磁力架上取下,加入500μL去蛋白液RD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),振荡混匀30sec。
- 将离心管放置于磁力架上静置30sec,磁珠完全吸附后,小心吸去液体。
- 加入600μL漂洗液PWB(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),振荡混匀30sec。
- 将离心管放置于磁力架上静置30sec,磁珠完全吸附后,小心吸去液体。
- 重复步骤9和10一次。
- 将离心管于磁力架上,室温晾干10~15min。
注意:乙醇残留会抑制后续的酶反应,所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥太长时间,以免难以洗脱DNA。 - 将离心管从磁力架上取下,加入50~100μL洗脱缓冲液TB,振荡混匀,置于65℃孵育3min。
- 将离心管放置于磁力架上静置1min,磁珠完全吸附后,小心将DNA溶液转移至一个新离心管中,并于适当条件保存。
二、移液法自动化仪器提取步骤
- 准备工作及注意事项:
- 本产品可整合Hamilton Microlab STAR、Beckman Coulter Biomek?FX等移液法自动化仪器进行高通量基因组提取工作。
- 植物样本的处理:同手工操作步骤1-3,裂解完成后转移300μL上清至96孔深孔板内。
- 磁珠稀释液的配制:按照15μL磁珠悬浮液G加入85μL异丙醇的比例混合,混合后每个样本用量为100μL。
- 对于Hamilton Microlab STAR类的仪器,有放置2mL离心管的板位,可以不使用异丙醇来稀释磁珠,异丙醇的加入体积仍为300μL。每个离心管可以放入1mL左右的磁珠,吸取磁珠前吹打混匀5次,直接进行15μL磁珠的分液操作,分液完成后将磁珠管盖盖好保存。
- 考虑仪器设定温度和96孔板内的实际温度有一定的偏差,在裂解和洗脱时建议仪器设定温度比实际使用温度高出10℃。
- 本产品可整合Hamilton Microlab STAR、Beckman Coulter Biomek?FX等移液法自动化仪器进行高通量基因组提取工作。
- 提取步骤:
- 在96深孔板(自备)中加入300μL处理好的植物样本上清液。
- 每孔加入300μL裂解液GHB,吹吸6次。
- 每孔加入215μL的异丙醇,吹吸6次。
- 每孔加入100μL磁珠稀释液,吹吸6次,然后振荡混匀10min。
- 将深孔板放置于磁力架上静置2min,磁珠完全吸附后,吸去液体。
- 将深孔板从磁力架上取下,加入500μL去蛋白液RD,吹吸6次,振荡混匀2min。
- 将深孔板放置于磁力架上静置30sec,磁珠完全吸附后,吸去液体。
- 将深孔板从磁力架上取下,加入600μL漂洗液PWB,吹吸6次,然后振荡混匀2min。
- 将深孔板放置于磁力架上静置30sec,磁珠完全吸附后,吸去液体。
- 重复步骤8和9一次。
- 将深孔板置于磁力架上,37℃晾干5min。
- 将深孔板从磁力架上取下,加入50~100μL洗脱缓冲液TB,置于65℃,振荡混匀10min。
- 将深孔板放置于磁力架上静置2min,磁珠完全吸附后,小心将DNA溶液转移至收集板中,并于适当条件保存。
- 在96深孔板(自备)中加入300μL处理好的植物样本上清液。
三、磁棒法自动化仪器提取步骤
- 准备工作及注意事项:
- 本产品在Thermo KingFisher Flex等自动化仪器上整合成功。
- 植物样本的处理:同手工操作步骤1-3,裂解完成后转移290μL上清至含有290μL缓冲液GHB和290μL异丙醇的96孔深孔板内。
- 将含有植物样本上清液,缓冲液GHB和异丙醇、500μL去蛋白液RD、600μL漂洗液PWB和50~100μL洗脱缓冲液TB分别加到96孔板相应的位置上,将15μL磁珠G加入到500μL去蛋白液RD中。
- 本产品在Thermo KingFisher Flex等自动化仪器上整合成功。
- 提取步骤:
- 将处理好的植物样本上清液加入到含有缓冲液GHB和异丙醇的96孔样品板里。
- 将96孔板置于自动化提取仪中,室温孵育5min,期间中速和快速间隔拍打混匀。
- 使用磁力套深入到含有磁珠的去蛋白液MRD的孔中,快速拍打混匀1min,吹散磁珠。
- 磁力棒深入到磁力套中,吸附磁珠3次,每次20sec。
- 将磁珠转移到含有植物样本上清液,缓冲液GHB和异丙醇的孔中,释放磁珠,中速和快速间隔拍打混匀10min。
- 磁力棒深入到磁力套中,吸附磁珠3次,每次20sec。
- 将磁珠转移到含有第一遍去蛋白液RD的孔中,释放磁珠,快速拍打混匀3min。
- 磁力棒深入到磁力套中,吸附磁珠3次,每次20sec。
- 将磁珠转移到含有第一遍漂洗液PWB的孔中,释放磁珠,快速拍打混匀3min。
- 磁力棒深入到磁力套中,吸附磁珠3次,每次20sec。
- 将磁珠转移到含有第二遍漂洗液PWB的孔中,释放磁珠,快速拍打混匀3min。
- 磁力棒深入到磁力套中,吸附磁珠3次,每次20sec。
- 磁力棒吸附磁珠后悬空晾干5min。
- 将磁珠转移到含有洗脱缓冲液TB的孔中,75℃孵育,快速拍打混匀10min。
- 磁力棒深入到磁力套中,吸附磁珠3次,每次30sec。
- 将吸附的废弃磁珠转移到含有去蛋白液RD的孔中,拍打混匀1min。
- 程序结束后,小心将DNA溶液转移至收集板,并于适当条件保存。
- 将处理好的植物样本上清液加入到含有缓冲液GHB和异丙醇的96孔样品板里。
DNA浓度及纯度检测:
- 得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
- DNA应在OD260处有显著吸收峰,OD260值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。
- OD260/OD280比值应为1.7~1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。
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